Comparison of techniques of detecting immunoglobulin-binding protein reactivity to immunoglobulin produced by different avian and mammalian species / Comparación de las técnicas de detección de la reactividad de la proteína de unión de la inmunoglobulina frente a la inmunoglobulina producida por diferentes especies aviarias y mamíferas

The rationale of this study was to use several immunological assays to investigate the reactivity of immunoglobulin binding protein (IBP) to immunoglobulins from various avian and mammalian species. The IBP studied were Staphylococcal protein A (SpA), Streptococcal protein G (SpG), Peptostreptococcal protein L (SpL) and recombinant protein LA (SpLA). The various immunological techniques used were double immunodiffusion (Ouchterlony technique) that tested positive high protein reactivities, direct and competitive enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) that tested moderate and low positive protein binding capacities, respectively. In addition to sandwich ELISAs, immunoblot analyses and Ig-purification by SpA-affinity chromatography, which were sensitive tests and helpful in the screening and confirmatory tests were also used. The Ouchterlony technique showed that compared to the other proteins, SpLA had the highest range of reactivity with animal sera and purified immunoglobulins while SpL was least reactive. With the direct ELISA, SpL reacted with the raccoon sera, rabbit IgG and with IgY from bantam hens and pigeons. While with the direct ELISA, SpA reacted with sera from skunk, coyote, raccoon, mule, donkey and human. The sandwich ELISA revealed high reactivity of both SpG and SpLA with mammalian sera titres ranging from 1:32 (raccoon serum) to 1:1024 (mule and donkey sera).These results suggest that IBP can be used for the detection of immunoglobulin using various immunological assays and this is important for the diagnosis of infectious diseases in animal and bird populations studied and in the purification of immunoglobulins.

El fundamento de este estudio radica en el uso de varios ensayos inmunológicos para investigar la reactividad de la proteína de unión de la inmunoglobulina (IBP) frente a las inmunoglobulinas de varias especies aviarias y mamíferas. Las proteínas IBP estudiadas fueron la proteína estafilocócica A (SpA), la proteína estreptocócica G (SpG), la proteína peptoestreptocócica L (SpL), y la proteína recombinante LA (SpLA). Las varias técnicas inmunológicas usadas fueron: la inmunodifusión doble (técnica de Ouchterlony) para examinar las reactividades positivas de la proteína alta; el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas(ELISA), de tipo directo y competitivo, para examinar la capacidad de realizar uniones positivas de proteína moderada y baja, respectivamente, además del ensayo ELISA 'Sándwich', los análisis inmunoblot, yla purificación de IgG, mediante cromatografía de afinidad, los cuales fueron pruebas sensibles y útiles en el tamizaje y las pruebas de confirmación. La técnica de Ouchterlony mostró que - en comparación con otras proteínas - la SpLA tenía el grado más alto de reactividad con los sueros animales y las inmunoglobulinas purificadas, mientras que la SpL fue la menos reactiva. Con el ELISA directo, la SpL reaccionó con los sueros de mapache, la IgG de conejo, así como con la IgY de palomas y gallinas de Bantam, en tanto con el ELISA directo, la SpA reaccionó con sueros de mofeta, coyote, mapache, mula, asno y seres humanos. ELISA "sándwich" reveló una alta reactividad tanto de SpG como de SpLA, con títulos séricos mamíferos que iban desde 1:32 (suero de mapache) hasta 1:1024 (sueros de mula y de asno). Estos resultados sugieren que la proteína de unión IBP puede usarse en la detección de la inmunoglobulina usando varios ensayos inmunológicos, lo cual es importante para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en las poblaciones animales y aviarias bajo estudio, así como para la purificación de inmunoglobulinas.

Prevalence and antimicrobial susceptibility pattern of pathogens isolated from patients with juvenile periodontitis in Jamaica: a prospective multi-centre study of 15 cases over a 15-year period / Prevalencia y patrón de susceptibilidad antimicrobiana de patógenos aislados de pacientes con periodontitis juvenil en Jamaica: estudio prospectivo multicentro de 15 casos por un período de más de 15 años

Prevalence and antimicrobial susceptibility pattern of most frequent pathogens isolated from patients treated with juvenile periodontitis at three separate dental centres in Jamaica from 1989 to 2003 were studied. Swabs were taken from these patients periodontal pathologic pocket or root of most of their teeth with active disease processes. These swabs were processed at the microbiology department of the University Hospital of the West Indies Kingston, Jamaica and the Microbiology laboratory, School of Veterinary Medicine, Faculty of Medical Sciences, University of the West Indies, St. Augustine, Trinidad and Tobago. The identification of the microorganisms from positive cultures and their antimicrobial susceptibility profile were performed using standard microbiological procedures and dick diffusion (KirbyBauer) methods. Over 80% of the patients were females. The most frequent microorganisms isolated were Enterobacter (40.5%), followed by Klebsiella species (19%) and Acinetobacter species (10.8%).Actinobacillus actinomycetemcomitans, a widely known key pathogen in juvenile periodontal diseases was encountered only in 5.4% (2/37) of the cases in this study. The most frequent organism isolated were still highly susceptibility to the commonly used and available antimicrobials such as amoxycillin/clavulanate,trimethoprim/sulphamethoxazole, chloramphenicol and aminoglycosides. The most frequent pathogens encountered in this study were totally different from what obtains in other places. There is the need to be aware of microbes in other countries during the microbiology investigations of juvenile periodontitis and that the antimicrobial chemotherapy should always be based on susceptibility test results. Surgical treatment for mechanical debridement of the site and bone grafting with guided tissue regeneration should be mandatory in conjunction with specific antimicrobial chemotherapy.

Se estudió la prevalencia y el patrón de susceptibilidad antimicrobiana de los patógenos más frecuentemente aislados de los pacientes tratados por periodontitis juvenil en tres diferentes centros odontológicos en Jamaica de 1989 a 2003. Se tomaron muestras de las bolsas patológicas periodontales de estos pacientes, o de la raíz de la mayor parte de sus dientes, en medio del proceso activo de la enfermedad. Las muestras fueron procesadas en el departamento de Microbiología del Hospital de la Universidad de West Indies, Kingston, Jamaica, y en el laboratorio de Microbiología, Escuela de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias médicas, Universidad de West Indies, San Agustín, Trinidad y Tobago. La identificación de los microorganismos a partir de cultivos positivos y su perfil de susceptibilidad antimicrobiana, se realizaron mediante procedimientos microbiológicos estándares y métodos de difusión por disco (KirbyBauer). Más del 80% de los pacientes eran mujeres. Los microorganismos más frecuentemente aislados fueron Enterobacter (40,5%), seguido por especies de Klebsiella (19%) y Acinetobacter (10,8%). Actinobacillus actinomycetemcomitans - un patógeno clave ampliamente conocido en enfermedades periodontales juveniles - se encontró sólo en 5,4% (2/37) de los casos en este estudio. Los organismos más frecuentemente aislados mostraban todavía una alta susceptibilidad frente a los antimicrobianos comúnmente usados y disponibles, tales como amoxicilina/clavulanato, trimetoprima/sulfametoxazol, cloranfenicol y los aminoglicósidos. Los patógenos más frecuentemente encontrados en este estudio fueron totalmente diferentes de lo que se obtiene en otros lugares. Es necesario tomar conciencia de los microbios en otros países durante las investigaciones de microbiológicas de la periodontitis juvenil, y no perder vista que la quimioterapia antimicrobiana debe basarse siempre en las pruebas de susceptibilidad. El tratamiento quirúrgico para el desbridamiento mecánico del sitio, así como el injerto óseo con regeneración tisular guiada debería, deben ser obligatorios en conjunción con la quimioterapia antimicrobiana específica.

Molecular detection and epidemiology of Extended-Spectrum beta-lactamase genes prevalent in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and E coli from Trinidad and Tobago / Detección molecular y epidemiología de genes de beta-lactamasas de Espectro extendido prevalecientes en los aislados clínicos de Klebsiella pneumoniae y E coli en Trinidad y Tobago

OBJECTIVE: The epidemiology of Extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) producing E coli and K pneumoniae is complex and varies among hospitals and countries. This study aimed at describing the molecular detection and epidemiology of ESBL subtypes prevalent in clinical isolates of K pneumonia and E coli in Trinidad and Tobago. METHODS: Over 36-months, isolates of E coli and K pneumoniae from clinical specimens of patients processed at a regional tertiary hospital in the country were identified using standard microbiological methods. MicroScan System (Siemens, USA) was used to determine MIC values while E-test (AB Biodisk, Sweden) assays phenotypically confirmed ESBL production. K pneumoniae (n= 65) and E coli (n = 25) isolates confirmed as ESBL producers were further subjected to multiplex PCR and PFGE tests to determine the ESBL subtypes and clonal relatedness. RESULTS: Female patients (67.8%) and urine samples (65%) yielded most ESBL isolates, with over 90% recovered from the hospital s medicine and surgery facilities. All ESBL isolates including all K pneumoniae producing ESBLs were 100% susceptible to carbapenems and amikacin antimicrobials. Polymerase Chain Reaction detected 100% blaTEM genes, 4.1% blaSHV and 37.5% bla cTX-M genes among E coli isolates. Similarly, 84.3% blaTEM, 34.5% blaSHv and 58.8% bla cTX-M genes were detected in K pneumoniae. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) results showed diverse and unrelated clones. CONCLUSIONS: In this the first report of molecular characterization and epidemiology of ESBL subtypes in E coli and K pneumoniae isolates in Trinidad and Tobago, the CTX-M, mainly phylogenetically group 1 type, was most predominant. Most ESBL isolates were still susceptible to carbapenems and aminoglycosides and their spread appears to be polyclonal and clonally unrelated.

OBJETIVO: La epidemiología de E coli y K pneumoniae productores de beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE) es compleja y varía de un hospital o país a otro. Este estudio tiene por objeto describir la detección molecular y la epidemiología de los subtipos de BLEE prevalecientes en aislados clínicos de K pneumonia y E coli en Trinidad y Tobago. MÉTODOS: Por más de 36-meses, se identificaron aislados de E coli y K pneumoniae a partir de especímenes clínicos de pacientes procesados en el hospital universitario regional del país, utilizando métodos microbiológicos estándar. Se utilizó el sistema MicroScan (Siemens, USA) para determinar los valores MIC, en tanto que la prueba del epsilómetro o E-test (biodisco AB, Suecia) confirmó fenotípicamente la producción de BLEE. Los aislados de K pneumoniae (n = 65) y E coli (n = 25) confirmados como productores de BLEE, fueron posteriormente sometidos a pruebas PCR multiplex y PFGE con el propósito de determinar los subtipos BLEE y la relación clonal. RESULTADOS: Las pacientes (67.8%) y las muestras de orinas (65%) arrojaron el mayor número de aislados de BLEE, siendo más del 90% tomados de las instalaciones de medicina y cirugía del hospital. Todos los aislados de BLEE, incluyendo todas las K pneumoniae productoras de BLEE resultaron 100% susceptibles a los agentes antimicrobianos carbapenem y amikacina. La reacción en cadena de la polimerasa detectó 100% de genes blaTEM, 4.1% de genes blaSHV y 37.5% de genes blaCTX-M entre los aislados de E coli. De manera similar, 84.3% de genes blaTEM, 34.5% blaSHV y 58.8% blaCTX-M fueron detectados en K pneumoniae. Los resultados de la electroforesis en gel de campos pulsados (PFGE) mostraron clones diversos y no relacionados. CONCLUSIONES: En este primer reporte de caracterización molecular y epidemiología de subtipos de BLEE en aislados de E coli y K pneumoniae en Trinidad y Tobago, el tipo principalmente filogenéticamente CTX-M grupo 1 fue el de mayor prevalencia. La mayoría de los aislados de BLEE eran todavía susceptibles a los carbapenems y los aminoglucósidos, y su extensión parece ser policlonal y no hallarse clonalmente relacionada.

Evaluation of methods and costs for detecting methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates from clinical specimens at regional hospitals in Trinidad and Tobago / Evaluación de métodos y costos para la detección de aislados de Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina a partir de especímenes clínicos en los hospitales regionales de Trinidad y Tobago

OBJECTIVES: To evaluate and determine the most cost effective, rapid and specific method for detection of methicillin resistance in clinical isolates of S aureus in a setting with limited personnel and resources. METHODS: Standard laboratory methods were used to identify S aureus isolates. The conventional Methicillin Resistance Staphylococcus aureus (MRSA) detection methods used included, 1 µg oxacillin disk diffusion, oxacillin salt agar screen (CLSI), penicillin binding protein (PBP 2') latex agglutination test and E-tests oxacillin. Results of conventional tests were compared with a polymerase chain reaction (PCR) method for detecting MRSA isolates. Polymerase chain reaction detection of the mecA gene in S aureus was used as the " gold standard" for MRSA identification. RESULTS: All methods had 100% sensitivity except for oxacillin disk diffusion and oxacillin-salt agar screening with 98% and 99%, respectively. Specificity was also 100% for all methods except for oxacillin-disk diffusion (99%). Turn around time (TAT) for detection of MRSA was calculated to be within six hours for PCR. The fastest TAT of 1.25 hours was obtained for PBP 2' latex agglutination. Total cost for labour and materials to perform each method was highest for E-test, US$13.76/isolate. The cost for PCR when compared to that of latex agglutination was not statistically significant (US$3.74 vs US5.91, p = 0.4). CONCLUSIONS: All methods presented high sensitivity and specificity, but the latex agglutination test had the advantage of giving a reliable, rapid and most cost effective result that compares well to PCR in this environment.

OBJETIVOS: Evaluar y determinar el método más específico, rápido y costo-efectivo para la detección de la resistencia a la meticilina en aislados clínicos de S aureus en un lugar con personal y recursos limitados. MÉTODOS: A fin de identificar los aislados de S aureus, se utilizaron métodos estándar de laboratorio. Los métodos convencionales de detección de SARM usados incluyeron difusión por disco de oxacilina de 1 µg, prueba de tamizaje (" screening" ) de oxacilina en agar-sal (CLSI), test de aglutinación en látex para la detección de la proteína 2 fijadora de la penicilina (PBP 2'), y la prueba E-Test de oxacilina. Los resultados de las pruebas convencionales fueron comparados con un método de PCR para la detección de aislados SARM. La detección por PCR del gene mecA en S aureus fue usada como " estándar de oro" para la identificación de SARM. RESULTADOS: Todos los métodos tuvieron 100% de sensibilidad excepto la difusión por disco de oxacilina y el tamizaje de oxacilina en agar-sal, con 98% y 99% respectivamente. La especificad también fue de 100% para todos los métodos, con excepción de la difusión por disco de oxacilina (99%). El tiempo de respuesta (TAT, del inglés turn around time) para la detección de SARM se halla, según los cálculos, dentro de las seis horas para PCR. El TAT más rápido, 1.25 hrs, se obtuvo en la aglutinación en látex de PBP 2'. El costo total del trabajo y los materiales en la ejecución de cada método fue más alto en la prueba de E-Test, aislado/$13.76 USD. El costo de PCR en comparación con el de la aglutinación látex no fue estadísticamente significativo ($3.74 USD vs $5.91USD, p = 0.4). CONCLUSIONES: Todos los métodos presentaron alta sensibilidad y especificidad, pero el test de aglutinación en látex tuvo como ventaja el ofrecer un resultado confiable, rápido y altamente costo-efectivo, no muy diferente del PCR en este ambiente.

Epidemiology of coagulase-negative Staphylococci isolated from clinical blood specimens at the University Hospital of the West Indies / Epidemiología de los Estafilococos Coagulasa Negativos Aislados de Especímenes Clínicos de Sangre en el Hospital Universitario de West Indies

The prevalence and significance of coagulase negative staphylococci (CoNS) isolated from blood cultures at the University Hospital of the West Indies (UHWI) during a six-month period were investigated. Standard and automated microbiological procedures were used to process 3001 blood culture specimens received from 2363 patients and 658 (21.9) of the blood cultures yielded 854 bacterial isolates. The highest prevalence of positive blood cultures (60) and the lowest prevalence of blood isolates of CoNS (12) were found in the intensive care unit (ICU). The blood isolates of CoNS were most frequent in the surgical wards (13) and lowest in obstetrics and gynaecology (2). High rates of resistance to methicillin, other anti-staphylococcal penicillins, and cephalosporins used in the treatment of CoNS were observed All blood isolates of CoNS (100) were susceptible to vancomycin. In conclusion, the results show that coagulase-negative staphylococci are the most prevalent bacterial isolates in blood cultures at the UHWI occurring mostly as contaminants. The practice of proper venepuncture and hand-washing techniques by medical staff are recommended to facilitate appropriate antibiotic usage.

Se investigó la prevalencia e importancia de los estafilococos coagulasa negativos (ECoN) aislados de cultivos de sangre en el Hospital Universitario de West Indies (HUWI) por un período de seis meses. Se utilizaron procedimientos microbiológicos estándar y automatizados para procesas 3001 cultivos de sangre recibidos de 2363 pacientes y 658 (21.9%) de los cultivos dieron 854 aislados bacterianos. La más alta prevalencia de cultivos de sangre positivos (60%) y la más baja prevalencia de aislados de ECoN (12%) se encontraron en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI). Los aislados de sangre de ECoN fueron más frecuentes en las salas de cirugía (13%) y más bajos en las de obstetricia y ginecología (2%). Se observaron altas tasas de resistencia a la meticilina, así como a otras penicilinas anti-estafilocócicas y cefalosporinas usadas en el tratamiento de ECoN. Todos los aislados de sangre de ECoN (100%) fueron susceptibles a la vancomicina. En conclusión, los resultados muestran que los estafilococos coagulasa negativos son los aislados bacterianos más prevalentes en cultivos de sangre en el HUWI, presentándose en la mayor parte de los casos como contaminantes. Se recomienda la práctica de técnicas adecuadas de venepuntura y lavado de manos por parte del personal médico a fin de facilitar un uso antibiótico correcto.